Lorsque l'ADN est sous-cloné dans la zone multicouche de pUC, la production de β-galactosidase est interrompue, ce qui rend les cellules incapables d'hydrolyser le X-Gal. Ce phénomène entraîne la production de colonies blanches au milieu de colonies bleues. Cette expérience produit un fragment d'ADN avec un plasmide linéaire et un ADN ligase T4. Suite à la ligature destinée à synthétiser le plasmide recombinant, les cellules d'E. coli compétentes sont transformées et les colonies blanches et bleues recombinantes résistant aux antibiotiques sont comptabilisées. L'activité de la β-galactosidase est testée à partir des cellules bactériennes bleues et blanches.
- Pour 5 groupes de laboratoire
- Ligature : 60 minutes ; transformation : 40 minutes ; incubation : toute la nuit
Autres éléments nécessaires : incubateur, bains-marie, micropipette automatique et pointes, spectrophotomètre, centrifugeuse et microcentrifugeuse.
Informations de livraison: Ce kit comprend les éléments suivants : instructions, plasmide pUC linéarisé et fragment d'ADN, ligase T4, LyphoCells bactériennes pour transformation, tampon de reconstitution, X-Gal en solvant, IPTG, chlorure de calcium, antibiotique, agar LB ReadyPour, milieu LB pour récupération, milieu de culture, composants de tests et fournitures en plastique.